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武漢貝科新肽科技有限公司

主營:原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選

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湖北熒光原位雜交-貝科新肽(推薦商家)

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  • 主營業(yè)務(wù):原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。1969年美國耶魯大學(xué)的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交,熒光原位雜交,將該基因進(jìn)行定位,與此同時(shí)Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行了細(xì)胞或組織的基因定位,從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。自此以后,由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展,特別是20世紀(jì)70年代末到80年代初,分子、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構(gòu)建成功,為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎(chǔ)。

而是對(duì)完整的斑馬魚胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測(cè),從整體上把握探針的結(jié)合部位,然后對(duì)胚胎進(jìn)行切片,以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用自顯影來檢測(cè);也可以是非同位素的探針,通過熒光或酶法予以檢測(cè)。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者,以標(biāo)記探針,然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測(cè)。

菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

(1) 在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。

(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟(1)。

(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復(fù)一次該步驟。

(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。

(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí),固定DNA。

(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。

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