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武漢貝科新肽科技有限公司

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湖北熒光原位雜交-貝科新肽(推薦商家)

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原位雜交技術(In situ hybridization,ISH)是分子生物學、組織化學及細胞學相結合而產生的一門新興技術,始于20世紀60年代。1969年美國耶魯大學的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細胞雜交,熒光原位雜交,將該基因進行定位,與此同時Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標記核酸探針進行了細胞或組織的基因定位,從而創造了原位雜交技術。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是20世紀70年代末到80年代初,分子、質粒和噬菌體DNA的構建成功,為原位雜交技術的發展奠定了深厚的技術基礎。

而是對完整的斑馬魚胚胎進行探針雜交及檢測,從整體上把握探針的結合部位,然后對胚胎進行切片,以確定探針結合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學研究中是一種非常重要的實驗方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用自顯影來檢測;也可以是非同位素的探針,通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者,以標記探針,然后用酶聯的方法進行檢測。

菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜

(1) 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤,讓濾膜留于原處2-3分鐘。

(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。

(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次該步驟。

(4) 吸干濾膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。

(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時,固定DNA。

(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。

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