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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括陽(yáng)性信號(hào)和陰性信號(hào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽(yáng)性信號(hào)是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號(hào)。陰性信號(hào)是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合進(jìn)行。
DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比，DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強(qiáng)度較弱，因此在雜交后的洗滌中不應(yīng)使用甲醛。
探針特異性至關(guān)重要。如果已知細(xì)胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列，則可據(jù)此設(shè)計(jì)高度的互補(bǔ)探針。如果超過(guò) 5% 的堿基對(duì)不互補(bǔ)，那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著，探針更容易在洗滌和檢測(cè)步驟中被洗去，可能無(wú)法正確檢測(cè)。
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