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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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熒光原位雜交技（fish）原理：是利用熒光標記的特異核酸探針與細胞內(nèi)相應的靶DNA分子或RNA分子雜交，通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號，來確定與特異探針雜交后被染色的細胞或細胞器的形態(tài)和分布，或者是結(jié)合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細胞器中的定位。
熒光原位雜交技（fish）實驗步驟：
1、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。
2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。
3、切片：石蠟經(jīng)切片機切片，攤片機撈片，62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無水乙醇Ⅰ 5min-無水乙醇Ⅱ 5min，風干，DEPC水浸泡。
5、消化：根據(jù)組織固定時間長短，切片于修復液中煮沸10分鐘，自然冷卻。后基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
意義
在研究DNA分子原理的基礎上發(fā)展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點，應用帶有標記的（有性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì)）DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細胞內(nèi)待測核酸（RNA或DNA）片段進行雜交，然后可用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位；用原位雜交技術，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
原位雜交的應用范圍：
①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達和基因組進化的研究；
②感1染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳1頭狀瘤1病毒和巨細胞病毒DNA的檢測；
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測；
④基因在染色體上的定位；
⑤檢測染色體的變化，分子病理技術服務，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等；
⑥分裂間期細胞遺傳學的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些腫1瘤的診斷和生物學劑量測定等。
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第4年
