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武漢貝科新肽科技有限公司

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原位雜交-武漢貝科新肽-原位雜交檢測

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同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?

一般情況下,如果操作沒有得到理想的結果,原位雜交檢測,是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針,染色體原位雜交,還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本,處理方法略有不同。

原位雜交實操中哪些因素比較重要?

重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關系到原位雜交的穩定性。

多彩色熒光原位雜交技術多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH)是在熒光原位雜交技術的基礎上發展起來的一種新技術,它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同,呈現多種色彩,因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術的局限,染色體熒光原位雜交,能同時檢測多個基因,在檢測遺傳物質的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應用

FISH是原位雜交技術大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質標記(間接或直接)而得名,原位雜交,該方法在80年代末 被發明,現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環境構成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

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