湖北原位雜交-武漢貝科新肽公司-染色體熒光原位雜交

詢盤留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號(hào)：595178640 更新時(shí)間：2025-04-04

武漢貝科新肽科技有限公司

主營業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)

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物流說明 : 貨運(yùn)及物流
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在ISHH，湖北原位雜交，整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期是比較長的，實(shí)驗(yàn)程序也比較繁雜，而雜交在ISHH整個(gè)實(shí)驗(yàn)中可被認(rèn)為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準(zhǔn)備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進(jìn)入細(xì)胞或組織與其內(nèi)的靶核苷酸相結(jié)合。因此，雜交是ISHH中關(guān)鍵的而且是重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。雜交是將雜交液滴于切片組織上，加蓋硅化的蓋玻片，防止孵育過程中的高溫（50℃左右）導(dǎo)致雜交液的蒸發(fā)。為保證雜交所需的濕潤環(huán)境，可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standard saline citrate， SSC）溶液的硬塑料盒中進(jìn)行孵育。雜交液的成分和預(yù)雜交液基本相同，所不同的是加入了標(biāo)記的核酸探針和硫酸葡聚糖。

以菌落原位雜交為例：對分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行篩選時(shí)，原位雜交檢測，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后，對菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

（1）在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2）用無菌牙簽將各個(gè)菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個(gè)平板的相同位置上。后，染色體熒光原位雜交，在濾膜和主平板上同時(shí)劃一個(gè)含有非重組質(zhì)粒的菌落。

（3）倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

（4）用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個(gè)以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。

（5）用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

（6）裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

原位雜交技術(shù)的原理是什么？有何用途

原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測DNA或RNA互補(bǔ)配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。

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