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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營(yíng)：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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| 先生： |
原位雜交第三天
1） 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時(shí)以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動(dòng)，室溫下顯色。
4）每隔一小時(shí)觀(guān)察胚胎是否開(kāi)始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位末端凋亡檢測(cè)（Tunel）
實(shí)驗(yàn)原理： TUNEL技術(shù)可對(duì)組織或細(xì)胞中凋亡小體或單個(gè)凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色，能準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點(diǎn)，利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標(biāo)有標(biāo)記物(如，生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端，再用組化法或熒光檢測(cè)凋亡細(xì)胞。
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第4年
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