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武漢科銳諾生物科技有限公司

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將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上

(1) 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

(2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上,再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進行劃線接種(或打點)。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。

(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。

(6) 裂解細(xì)菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。

FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,植物原位雜交技術(shù)服務(wù),可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。

分子病理學(xué)在蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子水平上,應(yīng)用分子生物學(xué)理論、技術(shù)及方法研究疾病發(fā)生L發(fā)展的過程,從而為傳統(tǒng)的病理學(xué)注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中,運用核酸原位雜交、PCR技術(shù)、免1疫熒光、免1疫組織化學(xué)染色等技術(shù),能夠更加深化對疾病的本質(zhì)認(rèn)識,對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導(dǎo)意義。分子病理學(xué)診斷主要應(yīng)用于以下幾個方面:1、對于腫1瘤易感基因的檢測,對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值,如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫1瘤相關(guān)病毒的檢測,如采用原位雜交方法檢測標(biāo)本中HPV、EBER等病毒。

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