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武漢貝科新肽科技有限公司

主營:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選

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染色體熒光原位雜交-原位雜交-貝科新肽(查看)

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武漢貝科新肽科技有限公司

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一. 原位雜交天

1. 重新水化和固定

1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。

2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘

3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復一次

4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘

5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

蛋白酶處理與后固定(本實驗不做此步)

1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節以下的胚胎不處理,染色體原位雜交,5體節到24小時的胚胎處理3分鐘,24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發育時間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。

2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。

3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。

4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,原位雜交,室溫。

FISH技術的基本步驟包括探針制備、樣品預處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中,使用熒光標記物代替同位素標記物來標記探針。在樣品預處理過程中,原位雜交檢測,細胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質等操作都是必要的,以提高探針與目標序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中,探針與樣品中的目標序列進行互補性雜交,形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細胞圖像。

原位雜交技術是在一定的溫度和離子濃度下,染色體熒光原位雜交,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規則與組織細胞內待測的核酸復性結合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位,并通過探針上所標記的檢測系統將其在核酸的原有位置上顯示出來。經特定標記的核苷酸鏈為探針,可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交,然后顯示標記物,從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術可研究各種基因在染色體上的定位,編碼某種蛋白質的mRNA在胞質中的表達。

染色體熒光原位雜交-原位雜交-貝科新肽(查看)由武漢貝科新肽科技有限公司提供。武漢貝科新肽科技有限公司為客戶提供“原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選”等業務,公司擁有“原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選”等品牌,專注于化學試劑等行業。,在湖北省武漢市洪山區關山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號的名聲不錯。歡迎來電垂詢,聯系人:夏先生。

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