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武漢貝科新肽科技有限公司

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植物組織原位雜交技術(shù)在植物基因表達(dá)和調(diào)控研究中具有廣泛的應(yīng)用。它可以用來研究植物發(fā)育、生長(zhǎng)、逆境響應(yīng)等方面的基因表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制。例如,可以利用該技術(shù)研究植物中的轉(zhuǎn)錄因子、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、代謝途徑等基因的表達(dá)和調(diào)控。此外,植物組織原位雜交技術(shù)還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測(cè)植物等方面。

總之植物組織原位雜交技術(shù)是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù),GISH,可以用來研究植物基因的表達(dá)和調(diào)控。它具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn),是植物分子生物學(xué)研究中不可或缺的工具。

在ISHH,整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期是比較長(zhǎng)的,實(shí)驗(yàn)程序也比較繁雜,而雜交在ISHH整個(gè)實(shí)驗(yàn)中可被認(rèn)為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準(zhǔn)備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進(jìn)入細(xì)胞或組織與其內(nèi)的靶核苷酸相結(jié)合。因此,雜交是ISHH中關(guān)鍵的而且是重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。雜交是將雜交液滴于切片組織上,加蓋硅化的蓋玻片,防止孵育過程中的高溫(50℃左右)導(dǎo)致雜交液的蒸發(fā)。為保證雜交所需的濕潤(rùn)環(huán)境,可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC(standard saline citrate, SSC)溶液的硬塑料盒中進(jìn)行孵育。雜交液的成分和預(yù)雜交液基本相同,所不同的是加入了標(biāo)記的核酸探針和硫酸葡聚糖。

雜交?。?) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺(tái)上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動(dòng)濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細(xì)菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號(hào)的強(qiáng)度和清晰度。(4) 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時(shí)用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時(shí)用42℃)下,預(yù)雜交1-2小時(shí)。

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