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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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直接法
將標(biāo)記的特異性熒光，直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定的溫度和時間的染色，用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光，室溫下干燥后封片、鏡檢。
間接法
如檢查未知抗原，先用已知未標(biāo)記的特異（）與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，用水洗去未反應(yīng)的，再用標(biāo)記的抗（第二）與抗原標(biāo)本反應(yīng)，使之形成—抗原—復(fù)合物，再用水洗去未反應(yīng)的標(biāo)記，干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知，則表明抗原標(biāo)本是已知的，待檢為，其它步驟的抗原檢查相同。
為什么有的基因定位結(jié)果與預(yù)想的不一致？
對于一個特定的定位載體，只要熒光表達(dá)較好，其定位結(jié)果是確定的，不會隨人為意愿或操作而改變。至于有時候和預(yù)想的結(jié)果不一樣，可能和蛋白本身、選擇的表達(dá)載體以及熒光蛋白融合方式等有關(guān)。
為什么有的普通定位結(jié)果出來后無法準(zhǔn)確判斷其定位位置？
細(xì)胞中的細(xì)胞器復(fù)雜且多樣，除一些常見的、特征比較明顯的細(xì)胞器外，有些細(xì)胞器在激光共聚焦下形狀比較相似，例如：線粒體、過氧化物酶體、高爾基體等細(xì)胞器，它們的熒光表達(dá)形狀可能都是點狀，因此不易區(qū)分。這時可以結(jié)合基因的其他功能研究來判斷其可能表達(dá)的位置。另外，蛋白表達(dá)本身也是一個復(fù)雜的過程，涉及到多個合成場所及轉(zhuǎn)運過程，自身表達(dá)情況可能比較復(fù)雜，因此不易判斷具體的表達(dá)位置。
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第3年
