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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營(yíng)：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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| 先生： |
阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。
雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液，濃度6ng/ul，恒溫箱37度雜交過(guò)夜。
雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。
滴加封閉液：滴加封閉血1清（正常兔血1清），室溫30min。
滴加鼠抗地1高辛標(biāo)記過(guò)氧化物酶（anti-DIG-HRP）：傾去封閉液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。
意義
在研究DNA分子原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過(guò)氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點(diǎn)，應(yīng)用帶有標(biāo)記的（有性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì)）DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸（RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交，然后可用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位；用原位雜交技術(shù)，可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。此方法有很高的敏感性和特異性，可進(jìn)一步從分子水平來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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第4年
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