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原位雜交是一種強(qiáng)大的技術(shù),它使研究人員能夠在細(xì)胞或組織中確定特定DNA或RNA序列的位置。這項(xiàng)技術(shù)在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用中都有廣泛的應(yīng)用。通過了解原位雜交的基本原理和實(shí)驗(yàn)步驟,原位雜交檢測(cè),研究人員可以更好地理解其功能并應(yīng)用于他們的研究中。

原位雜交技術(shù)的定義和基本原理原位雜交技術(shù)是一種基于核酸分子雜交原理,將標(biāo)記的核酸探針與生物組織或細(xì)胞中的DNA或RNA進(jìn)行特異性結(jié)合,從而在細(xì)胞水平上檢測(cè)目標(biāo)核酸序列分布的技術(shù)。原位雜交技術(shù)的基本原理是利用DNA或RNA的互補(bǔ)性,通過加熱或化學(xué)反應(yīng)使探針與組織或細(xì)胞中的目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)核酸序列的定位。

基因組原位雜交技術(shù)基因組原位雜交(Genome in situ hybridization,原位雜交,GISH)技術(shù)是20世紀(jì)80年代末發(fā)展起來的一種原位雜交技術(shù)。它主要是利用物種之間DNA同源性的差異,用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾瑁诎腥旧w上進(jìn)行原位雜交。GISH技術(shù)初應(yīng)用于動(dòng)物方面的研究(Pinkel et al.,熒光原位雜交,1986),在植物上早應(yīng)用于小麥和栽培種的鑒定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。

FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號(hào)檢測(cè)和圖像分析等。在探針制備過程中,使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過程中,細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的,植物原位雜交,以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中,探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交,形成可檢測(cè)的熒光信號(hào)。在信號(hào)檢測(cè)和圖像分析過程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測(cè)熒光信號(hào)并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。

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